微生物限度檢驗方法驗證方案

◆適用范圍

本方案適用于本公司各品種微生物限度檢驗方法的驗證。

◆目的

通過驗證確認所采用的方法適合于該藥品的微生物限度的測定 。

◆職責

項目責任人：負責驗證方案的起草及具體實施。

驗證管理員：負責驗證工作的組織、協(xié)調及管理。

QA現(xiàn)場監(jiān)控員：負責驗證實施過程中的監(jiān)督檢查，取樣，確保結果的可靠性。

QC負責人：負責驗證方案中檢驗方法的審核及按照規(guī)定的取樣計劃對標準檢驗操作程序的準確執(zhí)行，負責組織實施。

QC檢驗員：負責驗證方案的起草與參與實施，并對所測數(shù)據準確性負責。

質量部經理：負責驗證方案及報告的審核和批準。

 1.內容

1.1.概述

通過驗證以確認所采用的方法適合于該藥品的**、霉菌及酵母菌的測定；確認所采用的方法適合于該藥品的控制菌的檢查。根據樣品特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗，根據驗證結果判斷是否符合驗證標準。若符合，按驗證的方法和條件進行藥品的微生物限度檢查；若不符合，重新建立制訂檢驗方法和檢驗條件，再進行驗證，直至驗證結果符合設立的驗證標準。

1.2.**、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證

當建立藥品的微生物限度檢查時，應進行**、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該藥品的**、霉菌及酵母菌的測定。驗證試驗可與供試品的**、霉菌及酵母菌計數(shù)同時進行。

圖片

1.2.1.驗證用菌株及菌種要求

大腸埃希菌【CMCC（B）44102】

金黃色葡萄球菌【CMCC（B）26003】

枯草芽孢桿菌【CMCC（B）63501】

黑曲霉【CMCC（F）98003】

白色***【CMCC（F）98001】

大腸埃希菌為革蘭氏陰性菌，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌，枯草芽孢桿菌為產芽孢桿菌，前述菌株作為**計數(shù)驗證用菌株；黑曲霉為霉菌，白色***為酵母菌，作為霉菌及酵母菌計數(shù)驗證用菌株。

驗證實驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代 （從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為0 代），并采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的生物學特性。

1.2.2.驗證菌菌液制備

1.2.2.1. 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液制備：接種大腸埃希菌、金色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，35～37℃ 培養(yǎng)18～24小時。取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-6~10-7，制成每1ml含菌數(shù) 50～100cfu的菌懸液。

1.2.2.2.白色***菌液制備：接種白色***的新鮮培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng) 24～48小時；取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-6~10-7，制成每1ml含菌數(shù) 50～100cfu的菌懸液。

1.2.2.3.接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml 0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫，吸至無菌試管內，取1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-4~10-6，制成每1ml含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。

1.2.3. 供試液的制備

1.2.3.1.無抑菌活性的供試品供試液的制備

◆稀釋劑：pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液

◆液體供試品：供試品10ml置錐形瓶中，加入90ml稀釋劑，混勻，作為供試液（1：10）。

◆固體、半固體、粘稠性供試品供試品：稱取供試品10g置錐形瓶中，加稀釋劑至100ml，混勻后，作為供試液（1：10）。

1.2.3.2.具有抑菌活性的供試品供試液的制備